资料介绍
在 2013 年,来自麻省总医院的研究人员发现使用 CRISPR-Cas RNA 引导性核酸酶的一个重要局限:会在预期靶点以外的位点上生成多余的 DNA 突变。此后陆续有研究直接说明了 CRISPR/Cas9 存在严重的脱靶性,即该威廉希尔官方网站 可以发生非特异性切割,引起基因组非靶向位点的突变,这样会造成研究结果的不确定性以及研究工作的大量增加,这一问题严重地限制了 Cas9 的应用。
因此科学家们希望能通过全基因组检测脱靶剪切,近年来研发了不少检测脱靶剪切酶活性的实验方法,比如近期 Nature Methods 报道的两项威廉希尔官方网站 ,这些威廉希尔官方网站 是什么,具有何种优势,具体让我们来看看:
GUIDE-seq 以往人们在检测 CRISPR-Cas 核酸酶诱导的脱靶 DNA 断裂时,往往事先假定脱靶位点与靶标位点相似。GUIDE-seq 是首个不需要这样做的方法,而且它相当灵敏 。一组研究人员利用一种短双链寡核苷酸来标记 CRISPR-Cas 诱导的脱靶断裂,测序这些标签所在的基因组区域,就能够确定脱靶突变的位置。研究表明,就算某个脱靶突变的出现频率低至 0.1%,GUIDE-seq 也能够检测得到。由于许多脱靶突变发生在与目标位点差异很大的地方,因此脱靶 DSB 的数量和位置是很难预测的。
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