空间转录组云平台是SBCToolBox的一个VIP模块,包括了数据的输入、预览、类群的展示、差异计算、降维可视化、基因在空间位置表达的可视化、常见的小提琴图、山脊图、热图、DotPlot展示、亚群分析,meta信息添加等组件。
首先了解一下Visium空间转录组和单细胞转录组的两个重要区别?
●Visium空间转录组是以Spot为单位。实验上以Spot为单位组织中的RNA,分析上也是以Spot为单位。
●Visium空间转录组比单细胞转录组多了空间位置信息。
两者的定量数据都呈现出多特征基因、多观测值的特点,在数据分析上的套路也都遵循着数据标准化、降维、分群聚类、差异计算、可视化等分析的一致性。
了解了空间转录组和单细胞转录组的异同,接下来我们来正式学习一下SBCToolBox空间转录组分析云平台,以Seurat stxBrain数据为例进行详细说明。
空间转录组云平台继承了单细胞云平台优良基因,需要认证才能登录云平台,没有账号的同学请登录站点,注册申请,审核通过会以邮件的形式发放合法账号。
https://www4.shbiochip.com/V2023/ST/
下面将详细介绍空间转录组云平台的功能及特点。
01
输入&细胞信息预览
上传输入数据为.RDS文件(R保存单个对象数据的格式文件)。
此页面可以看到一共两行三个Box,第一行两列Box,第二行一个Box。
● 第一行第一列Box提供数据上传接口、提交分析接口及meta信息下载接口。数据上传:这里可以直接将RDS文件拖拽至 获取数据 接口,完成上传后会显示 upload complete 反馈,点击 提交分析 按钮即可查看空间转录组的meta信息的概况。 ●第一行第二列的Box用于展示 Seurat对象的meta信息,展示每个SPOT每个SPOT基因、分子检出、对应样本、分群结果等概况。
●第二行Box对SPOT的汇总,显示该项目一共有多少个SPOT点,样品数量,分群情况,充分地了解空间转录组数据。
02
Cluster展示
a) 默认展示,主要展示UMAP、t-SNE、样本与类群间比例BarPlot情况。
i. 默认展示与单细胞云平台基本一致。
ii. 分群结果在空间位置上的分布情况展示。
b) Arrow展示 i. 提供个性化UMAP & t-SNE添加箭头展示,让数据不再那么枯燥。
03
差异计算
a) 单个类群对比其他类群,FindMarkers()函数计算当前cluster与剩余其他cluster间的Marker基因。
i. 设置阈值(Pvalue,logfc,上下调)筛选差异marker结果,可以根据实际需求灵活调整,也可以调整Marker基因筛选方法计算marker。
ii. TopN Marker基因结果,根据显著性pvalue和差异倍数logfc的排序进行topN筛选。
b) 指定类群间的比较
i.为了满足指定Cluster间或者分组间的差异Marker进行差异比较
04
GeneExp Scatter Chart
a)主要展示基因在UMAP或者t-SNE的分布情况
i.这里直接打开TopN Marker基因复制GeneSymbol信息粘贴到 自定义输入基因接口中,提交分析即可得到展示结果
ii. 此模块高度灵活,可以自定义色阶变化,多变主题,多基因列数调整
05
GeneExp Spatial Chart
a)基因集在空间位置上的表达展示
i. 复制GeneSymbol信息粘贴到输入接口中,进行FeatureSpatialPlot展示。
06
Violin& Ridge Chart
a)主要用于marker基因在类群中小提琴图和山脊图的展示。
i.这里与单细胞云平台结果展示一致,示例展示的为Dark主题下的结果。
07
HeatMap Chart
a)与单细胞展示一致,主要展示marker基因在每个Cluster或者分组中表达的显著强度。这里可以灵活调整色阶变化,分组bar的颜色,要展示的类群信息。
08
DotPlot Chart
a)与单细胞展示方式基本一致,marker基因在DotPlot展示。
09
亚群分析
a)筛选亚群重新分析
i.筛选出目标亚群或者多个样本中的其中一部分样本进行亚群分析,也可以实现调整参数重新分析以调整分群的数量。
b)提取目标亚群
i.这一组件主要是为了筛选出目标亚群,进行数据保存,进行下游的其他数据分析,及时保存记录结果,保持分析的连贯性。
10
SPOT信息添加
a)Seurat 对象meta信息添加,主要是为了满足对修改分群结果名称,或者将多个cluster结果进行合并新名称的添加,用于下游展示。
b)上传barcode对应新名称一一对应关系。
c)指定列,提交分析,即可完成信息添加,下载保存RDS,再上传至云平台即可进行新的下游分析。
以上结果在云平台可以做到立等可取,再也不用花费长时间等数据分析结果了。
审核编辑:彭菁
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原文标题:SBCToolBox空间转录组分析云平台重磅上线
文章出处:【微信号:SBCNECB,微信公众号:上海生物芯片】欢迎添加关注!文章转载请注明出处。
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